【试验连载7】控释型复合酸对ETEC感染小鼠肠道保护作用的研究
理财鱼小提示：【试验连载7】控释型复合酸对ETEC感染小鼠肠道保护作用的研究
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【试验连载7】控释型复合酸对ETEC感染小鼠肠道保护作用的研究
试验目的：
研究控释型复合酸制剂对ETEC攻毒小鼠机体免疫力、肠道屏障功能及微生态的影响
试验单位：
江西农业大学江西省动物营养重点实验室，江西省优质安全畜禽生产产教融合重点创新中心，广东酸能生物科技有限公司
试验产品：
控释型复合酸制剂，采用酸效控释技术，以苯甲酸、乳酸等有机酸为主，商品名为爱酸灵5001。
试验设计：
验共分为6个处理，每个处理6个重复，每个重复3只小鼠。处理一为对照组（CON），饲喂基础饲粮；处理二为攻毒组（ETEC），饲喂基础饲粮；处理三为纯苯甲酸粉组，在基础饲粮中添加2.0%的纯苯甲酸粉（含量≥99.5%）；处理四、五、六为控释型复合酸组，分别在基础饲粮中添加1.0%、1.5%和2.0%的控释型复合酸。ETEC菌株购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心，血清型为O149: K91: K88ac。攻毒前，各处理组小鼠连续采食相应饲粮14天，第15天采用ETEC菌液攻毒，建立腹泻模型，攻毒途径为腹腔注射。攻毒后，各处理组小鼠继续饲喂各自试验饲粮7天。试验设计见表1。
表1 试验设计
试验结果：
1.控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠体重的影响
表2 控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠体重的影响
注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），相同或无字母表示差异不显著（P＞0.05）。下表同。
由表2可见，攻毒前，连续饲喂试验饲粮14d后，各处理组小鼠的平均日增重和平均日采食量无显著差异（P＞0.05），但从数值上看，中剂量控释型复合酸组的饲料利用效率最高。攻毒后，ETEC组和低剂量控释型复合酸组小鼠体重显著低于CON组小鼠（P＜0.05）。
2.控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠器官指数的影响
表3 控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠器官指数的影响
由表3可见，攻毒前，连续饲喂试验饲粮14d后，各处理组小鼠器官指数无显著差异（P＞0.05）。攻毒后，与CON组相比，ETEC组小鼠脾脏指数（24h和168h）、肾脏指数（24h）显著增加（P＜0.05），控释型复合酸组小鼠心脏指数和肾脏指数显著增加（24h; P＜0.05），低剂量控释型复合酸组小鼠肝脏指数显著降低、脾脏指数显著增加（168h; P＜0.05）；与ETEC组相比，低剂量控释型复合酸组小鼠肝脏指数显著降低（168h; P＜0.05）。
3.控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠免疫反应的影响
表4 控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠血清免疫指标的影响
由表4可见，攻毒前，连续饲喂试验饲粮14d后，各处理组血清炎性因子含量无显著差异（P＞0.05）。攻毒后，与CON组相比，ETEC组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、INF-γ和D-lactate含量显著增加（24h、168h；P＜0.05），DAO活性显著提高（24h；P＜0.05）；与ETEC组相比，低剂量控释型复合酸组小鼠血清中D-lactate含量和DAO活性显著降低（24h；P＜0.05），中剂量控释型复合酸组小鼠血清中IL-1β（24h、168h）、TNF-α（24h）、INF-γ（24h、168h）、D-lactate（24h）和DAO活性（24h）含量降低（P＜0.05），高剂量控释型复合酸组小鼠血清中TNF-α、INF-γ和D-lactate含量及DAO活性显著降低（24h；P＜0.05）。
4.控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠空肠形态结构的影响
表5 控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠空肠形态结构的影响
图1 小鼠空肠组织形态图
由表5和图1可见，攻毒前，连续饲喂试验饲粮14d后，各处理组小鼠空肠绒毛排列整齐密集且无显著差异（P＞0.05）。攻毒后，小鼠空肠绒毛稀疏、排列不整，部分脱落，饲粮添加控释型复合酸能够缓解ETEC感染导致的小鼠肠道绒毛结构损伤。与CON组相比，ETEC组小鼠空肠绒毛高度和VCR（绒毛高度与隐窝深度比值）显著降低（24h、168h；P＜0.05）；与ETEC组相比，中剂量控释型复合酸组小鼠空肠绒毛高度和VCR比值显著增加（24h、168h；P＜0.05），高剂量控释型复合酸组小鼠空肠VCR比值显著增加（168h；P＜0.05）。
5.控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠空肠黏膜炎性因子表达的影响
表6 控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠空肠黏膜炎症因子mRNA表达的影响
注：TLR，Toll样受体；MyD88，髓样分化因子
由表6可见，攻毒前，连续饲喂试验饲粮14d后，各处理组小鼠空肠黏膜中TLR-2、TLR-4和MyD88 mRNA表达水平无显著差异（P＞0.05）。攻毒后，与CON组相比，ETEC组小鼠空肠黏膜中TLR-2、TLR-4和MyD88 mRNA表达水平显著提高（24h和168h；P＜0.05），低剂量控释型复合酸可以显著抑制ETEC引起的空肠黏膜MyD88 mRNA过表达（24h；P＜0.05），中剂量控释型复合酸可以显著抑制ETEC引起的TLR-2（24h）和MyD88（24h和168h） mRNA过表达（P＜0.05），高剂量控释型复合酸可以显著抑制MyD88（24h） mRNA过表达（P＜0.05）。
6.控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠空肠黏膜紧密连接蛋白基因表达的影响
表7 控释型复合酸对大肠杆菌攻毒小鼠空肠黏膜紧密连接蛋白基因表达的影响
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